1、范围
适用于软硬组织病理切片

2、规范引用标准参考
席 越 «骨组织病理解剖学技术»  第2版   人民卫生出版社

3、染色内容
3.1  HE染色
3.1.1  染液配制
苏木素 1g；无水乙醇 10ml；硫酸铝钾 20g；蒸馏水 200ml；氧化gong 0.5g；冰醋SUAN 8ml；先用无水乙醇溶解苏木素，用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾；然后将该两液合并煮沸，加入氧化gong，继续加热和搅拌溶液至深紫色，随即用冰水冷却，恢复至室温后过滤备用。使用前加入冰醋SUAN并混匀、过滤；0.25～0.5%伊红Y水溶液；伊红Y 0.25～0.5g；蒸馏水 100 ml；冰醋SUAN1滴
3.1.2  染色程序
3.1.2.1  二甲benⅠ 5～10min
3.1.2.2  二甲benⅡ 5～10min
3.1.2.3  无水乙醇Ⅰ 1～3min
3.1.2.4  无水乙醇Ⅱ 1～3min
3.1.2.5  95%乙醇Ⅰ 1～3min
3.1.2.6  95%乙醇Ⅱ 1～3min
3.1.2.7  80%乙醇 1min
3.1.2.8  蒸馏水 1min
3.1.2.9   苏木素液染色 5～10min
3.1.2.10  流水洗去苏木素液 1min
3.1.2.11  1%盐酸-乙醇 1～3s
3.1.2.12  稍水洗 1～2s
3.1.2.13  返蓝（用温水或1% An水等） 5～10s
3.1.2.14  流水冲洗 1～2min
3.1.2.15  蒸馏水洗 1～2min
3.1.2.16  0.5%伊红液染色 1～3min
3.1.2.17  蒸馏水稍洗 1～2s
3.1.2.18  80%乙醇 1～2s
3.1.2.19  95%乙醇Ⅰ 2～3min
3.1.2.20  95%乙醇Ⅱ 2～3min
3.1.2.21  无水乙醇Ⅰ 3～5min
3.1.2.22  无水乙醇Ⅱ 3～5min
3.1.2.23  石炭SUAN-二甲ben 3～5min
3.1.2.24  二甲benⅠ 3～5min
3.1.2.25  二甲benⅡ 3～5min
3.1.2.26  二甲benⅢ 3～5min
3.1.2.27  中性树胶封固
3.1.3  染色结果
细胞核呈蓝色，细胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色，钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。

3.2 Van Gieson 胶原纤维染色
3.2.1  染液配制 
甲液：1%酸性品红水溶液 乙液：苦味suan饱和水溶液（约 1.2%） 甲、乙两液分瓶盛放；临用前取甲液 1 份，乙液 9 份混合后使用
3.2.2    染色程序
3.2.2.1  组织用 Zenker 氏液或 10%甲醛固定，常规石蜡切片。
3.2.2.2  切片脱蜡至水。
3.2.2.3  用 Weigert 氏铁苏木素染核 5-10 分钟。
3.2.2.4  自来水冲洗数分钟。
3.2.2.5  盐酸乙醇分化。
3.2.2.6  返蓝，蒸馏水洗。
3.2.2.7  入 V.G 染液染色 2-3 分钟。
3.2.2.8  蒸馏水速洗，迅速脱水或晾干。
3.2.2.9  透明、封固。
3.2.3  染色结果
胶原纤维红色，肌纤维呈黄色，胞核蓝黑色。

3.3  Masson 三色染色
此法最好用 Zenker 液或 Bouin 液固定，10%甲醛液固定也可，若再用重铬酸jia液处理后也能获得较好的结果。 
3.3.1  染液配制
Regaud 苏木素染液 苏木素 1g；95% 乙醇 10ml；甘油 10ml；蒸馏水 80ml；丽春红酸性复红液 丽春红 0.7g；酸性复红 0.3g；蒸馏水 99ml；冰醋SUAN 1ml；醋酸ben胺蓝液 苯胺蓝 2g,；蒸馏水 98ml,醋酸 2ml；苦味suan乙醇液 苦味suan（约7%）在95%乙醇中的饱和液 20ml，再加 95%乙醇 10ml
3.3.2  染色程序
3.3.2.1 切片脱蜡至水，如用 Zenker 液固定，应进行除汞处理。
3.3.2.2  Regaud 苏木素液染 5min。
3.3.2.3  95%乙醇中洗 2 次。
3.3.2.4  在苦味suan乙醇液中分色。
3.3.2.5  在流水中洗，蒸馏水洗。
3.3.2.6  丽春红酸性复红液中染 5min.
3.3.2.7  蒸馏水洗。
3.3.2.8  1%磷钼酸中染 5min.
3.3.2.9  不经水洗，直接入醋酸ben胺蓝液中 5min。
3.3.2.10  1%醋酸处理 1min。
3.3.2.11  95%乙醇脱水，无水乙醇脱水多次。
3.3.2.12  二甲ben透明，中性树胶封固。
3.3.3  染色结果
胶原纤维呈蓝色，弹力纤维棕色，肌纤维、纤维素、红细胞呈红色，胞核呈 黑蓝色

3.4  甲ben胺蓝染色
3.4.1  染液配制
甲ben胺蓝 2g；蒸馏水 100ml
3.4.2、染色程序
3.4.2.1  切片脱蜡至水。
3.4.2.2  蒸馏水洗。
3.4.2.3  甲ben胺蓝染色1-1.5分钟。
3.4.2.4  水洗。
3.4.2.5  丙酮脱水、透明。
3.4.2.6  中性树胶封固。
3.4.3  染色结果
软骨基质呈红色，其他组织染成不同色调的蓝色。

3.5  Von Kossa染色
3.5.1  染液配制
硝酸yin 2g；蒸馏水 100ml；复染液；中性红1g；蒸馏水  100ml
3.5.2  染色程序
3.5.2.1  未脱钙骨切片脱塑至水。
3.5.2.2  蒸馏水洗。
3.5.2.3  浸于染色液中（在银液中染色的时间随阳光曝光的时间而定，如直接用紫外线灯照射，5分钟即可。）
3.5.2.4  蒸馏水洗。
3.5.2.5  浸入5%硫代硫酸钠水溶液中2分钟。
3.5.2.6  充分水洗，蒸馏水充分水洗。
3.5.2.7  复染液1分钟。
3.5.2.8  脱水、透明、封固。
3.5.3  染色结果
钙质（磷酸盐及碳酸盐）呈棕黑色，核红色。

3.6  茜素红S染色
3.6.11  染液配制
茜素红S1g；蒸馏水90ml；1% An水10ml；复染液：淡绿1g；蒸馏水100ml
3.6.2  染色程序
3.6.2.1  未脱钙骨切片脱塑至水。
3.6.2.2  入染色液5-10 分钟。
3.6.2.3  蒸馏水洗。
3.6.2.4  入复染液内30秒。
3.6.2.5   0.2%-1.0%醋酸水中速洗。
3.6.2.6  滤纸吸干。
3.6.2.7  95%乙醇中脱色。
3.6.2.8  透明封固。
3.6.3  染色结果
钙质呈橘红色，核呈暗绿色。

3.7  Alcian blue染色（pH2.5）
3.7.1  染液配制
 3%醋酸水溶液；阿尔新蓝染液： 阿尔新蓝1g；3%醋酸水溶液 100ml；0.5%中性红水溶液
3.7.2  染色程序
3.7.2.1   石蜡切片4-6μm，脱腊至蒸馏水洗数次。
3.7.2.2   用3%醋酸水溶液洗涤。
3.7.2.3   入阿尔新蓝染液染10-30分钟。
3.7.2.4   3%醋酸水溶液洗涤，吸水纸吸干。
3.7.2.5   0.5%中性红水溶液染细胞核2-3分钟。
3.7.2.6   水洗，常规脱水，透明，中性树胶封固。
3.7.3  染色结果
酸性粘液（唾液酸粘液）呈鲜蓝绿色，细胞核呈红色。