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艾佧科技企业标准-硬组织切片技术规范
人阅读 发布时间：2022-03-04 18:11
1 范围
本规范使用技术所指的硬组织，包括；
（1）以松质骨为主要结构的不脱钙骨组织。
（2）其他含有较软金属支架材料的冠状动脉血管等含金属材料的组织。
不适用于牙齿、皮质骨以及含较大或坚硬金属植体的骨组织，带金属支架的大动脉或大静脉血管，其他坚硬的材料。
2 设备与器材
2.1 制样设备
2.1.1 切片机：自动轮转式或平推式。
2.1.2 电热鼓风干燥箱：调温范围50℃-200℃。
2.1.3 冰箱：温度范围 -20℃- 4℃。
2.1.4 普通光学生物显微镜。
2.1.5 通风柜。
2.2 制样工具
2.2.1 钨钢刀：40゜
2.2.2 不锈钢尖镊子。
2.2.3 粘附载玻片。
2.2.4 小毛刷。
2.2.5 记号笔。
2.2.6 压片器。
2.2.7 Ⅰ型或圆形样本夹。
2.3 材料
2.3.1 组织固定剂
a）中性福尔马林组织固定液；
b）70%酒精。
2.3.2 组织脱水透明剂
a）酒精，使用浓度：50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100%；
b）二甲ben；
QBZAICA-0001-2020
警告——对人体有害，应在通风柜中使用。
c）丙酮。
警告——对人体有害，应在通风柜中使用。
2.3.3 树脂浸润包埋剂
a）甲基丙烯酸甲酯；
b）邻ben二甲酰二丁酯；
c）过氧化ben甲酰；
d）聚甲基丙烯酸甲酯；
e）N,N,3,5-四甲基ben胺；
f）1-金刚烷硫醇。
警告——以上试剂均对人体有害，应在通风柜中使用。
2.3.4 脱塑剂
a）乙二醇乙mi乙酸酯；
b）乙二醇甲醚乙酸酯。
警告——以上试剂均对人体有害，应在通风柜中使用。
2.3.5 自凝树脂。
警告——对人体有害，应在通风柜中使用。
2.3.6 载玻片规格：25mm×75mm，厚1mm-1.2mm。
2.3.7 盖玻片规格：24mm×24mm，24mm×32mm，厚0.13mm-0.17mm。
3 制片步骤
3.1 登记编号与组织分切
3.1.1 制作人员验收标本时，应仔细核对组织标本数量、实验编号等信息，并与受理人或送样人核对是否一致并确认。如有不同者，应立即与受理人或送样人联系予以纠正。
3.1.2 按与送样人确定的分切方向，对组织进行分切，登记编号，将组织放置于脱水盒中，开始脱水。
3.2 组织脱水浸润包埋
3.2.1 根据组织大小及取材部位，选择正确的脱水程序，由低浓度酒精到高浓度酒精顺序，去除组织内水份。
3.2.2 脱水后的组织经二甲ben进行透明，去除组织内的脂质。
3.2.3 经透明后的组织，于甲基丙烯酸甲酯与邻ben二甲酸二丁酯混合液中浸润，使树脂完全浸入组织内部，浸润液按加入聚合催化剂剂量的多少，分为一浸液，二浸液，三浸液，组织在每种浸液中浸润二天。
3.2.4 浸润完毕的组织于玻璃容器中包埋，包埋液为新鲜配制的第三浸液。包埋聚合时间一般为3-5天。
3.3 粘固
3.3.1 将包埋好的树脂块修整至合适大小，并暴露出组织面，且保证组织块上下平行。
3.3.2 将修整好的组织块用自凝树脂粘接于制作好的底座上。
3.4 切片
警告——切片时容易伤手，应做好防护。
3.4.1 开启切片机，将组织固定于样本夹中，于自动轮转式或平推式切片机上，修整出完整的组织面。
3.4.2 切取5微米厚的薄切片，用不锈钢尖头镊夹取切片，再用毛刷将切片于70%酒精溶液中展平。
3.4.3 将切片捞取在玻璃载玻片上，盖上塑料薄膜，放置于压片器中夹紧，于50℃干燥箱中过夜粘固。
3.5 脱塑
3.5.1 次日从干燥箱中取出切片，取下薄膜，放于染色架中。
3.5.2 于乙二醇乙mi乙酸酯或乙二醇甲醚乙酸酯中脱去树脂。
3.6 染色
硬组织切片可以进行石蜡切片所能进行的全部染色，只是染色时间等条件做相应调整。
4 质量标准
4.1 组织脱水透明及浸润
组织脱水应充分，二甲ben透明要适度，浸润要完全。
4.2 组织包埋块
组织包埋块应保证组织位置平正，包埋液体要没过组织不少于1cm，聚合时无气泡。
4.3 切片厚度
一般为5微米厚，但为观察荧光素的切片厚度应为10微米。
4.4 结构
切片应完整，厚度均匀，无裂纹，无破损。
4.5 编号
切片、包埋块编号应于标本及送样单一致，并于包埋及切片时再次核对，签字确认。
4.6 染色
按照染色规范要求对硬组织薄切片进行相应染色，并做相应调整。
5 安全与环保要求
硬组织制片过程中使用的组织分切机、切片机、钨钢刀、酒精、甲基丙烯酸甲酯等容易伤人或易发生火灾的危险品。应注意制作过程符合安全和环保要求：
a）制片人员分切样本时，应佩戴口罩，及防护手套；
b）制片人员在切片时，应注意切片刀的位置，取放组织块时应锁定切片机，并放下切片刀保护板；
c）制片室应注意通风、防火、配备换气设备和消防器材；
d）组织处理及制片中产生废有机试剂，应装入带盖的瓶中，注明标签，按有关规定统一处理。
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